| Resumen | Aborda la implementación de un método eficiente y consistente para la purificación del anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1 empleado en la purificación del antÃgeno de superficie del virus de la Hepatitis B (AgsVHBr), asà como la demostración de su capacidad de eliminación de virus. También se exploró la potencialidad del tratamiento térmico del AgsVHBr en presencia de KSCN para inactivar virus. El empleo de este AcM brinda una alta selectividad y originalidad al método de obtención del AgsVHBr, pero aporta inconvenientes desde el punto de vista regulatorio por el uso de fuentes biológicas que pueden introducir virus patógenos al hombre.El diseño del método de purificación del CB.Hep-1 se basa en la combinación de precipitación salina, cromatografÃas de afinidad y de exclusión molecular y un paso de ultrafiltración, lo cual permite obtener esta molécula con alta pureza (>95%) y recobrado (>40%). Una vez implementado este método y demostrada su consistencia, se procedió a la caracterización de las fuentes biológicas para la presencia de virus y se validó el desescalado de la cromatografÃa de afinidad empleada en la purificación del AcM CB.Hep-1. Finalmente, se calculó la capacidad de eliminación de virus mediante el desafÃo con virus de la cromatografÃa de afinidad, los procedimientos de higienización y almacenamiento de la matriz de afinidad en etanol, la incubación del AcM en tampón ácido y el tratamiento térmico del AgsVHBr. Los virus modelos empleados en los experimentos de desafÃo fueron el virus sendai, el virus de la inmunodeficiencia humana, el virus herpes simple humano 1, el poliovirus humano 2 y el parvovirus canino. Los resultados demuestran que este método de purificación del AgsVHBr, no sólo permite su obtención con alta pureza y recobrado sino que también posee una capacidad de eliminación de virus superior a 14 Logs por encima de la contaminación viral de la fuente biológica. Entre los elementos novedosos está en la implementación de un método eficiente y consistente para la purificación del AcM CB.Hep-1, lo cual permite su utilización en la cromatografÃa de inmunoafinidad para purificar el AgsVHBr. Por otra parte, esta es la única vacuna contra la Hepatitis B obtenida a través de esta metodologÃa que usa un AcM como ligando para purificar el AgsVHBr. Otro aspecto novedoso es que se demuestra la seguridad virológica del método de purificación del AgsVHBr. Esto constituye el primer estudio de validación viral realizado al método de obtención de un antÃgeno vacunal que emplea en su purificación una proteÃna proveniente de fuentes biológicas que pueden introducir virus patógenos al hombre. Este trabajo informa además, las bondades del uso de la cromatografÃa de inmunoafinidad para purificar el AgsVHBr y por primera vez, la alta capacidad de inactivación de virus de la combinación del KSCN con elevadas temperaturas, lo cual justifica su empleo en la obtención de biológicos. Informa también por primera vez el alto grado de inactivación del etanol 70% sobre el parvovirus canino, modelo para el parvovirus de ratón, con elevada resistencia a los agentes fÃsico-quÃmicos y la baja capacidad del etanol al 20% para inactivar virus desnudos. En conclusión, el aporte práctico principal es que la implementación de un método de purificación del AcM CB.Hep-1 y la demostración de su capacidad de eliminación de virus en combinación con el tratamiento térmico del AgsVHBr en presencia de KSCN ha permitido llevar a cabo un extenso programa de vacunación a escala nacional y de exportación de más de 100 millones de dosis de la vacuna cubana contra la Hepatitis B. |
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| Institución donde se realiza | Universidad de La Habana. Facultad de BiologÃa |
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| Tipo de tesis | |
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| Año de defensa de la tesis |
| Tutor 1 | Duarte Cano, Carlos |
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| Versión de tesis | |
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| Departamento | Facultad de BiologÃa |
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| Lista de descriptores | |
| Número de la resolución | 5/2008 |
| Año resolución | |
| Texto Completo |
| Modificado el | 2023-07-07 10:39:00 |
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| Fecha creación | 2023-07-07 10:39:00 |
| Fecha de publicación | 2023-07-07 10:39:00 |
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