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Repositorio de Tesis en Ciencias Biomédicas y de la Salud de Cuba

Expresión y caracterización de un fragmento de anticuerpo recombinante con potencialidades para ser usado en la radioinmunoterapia de tumores CEA positivo

Pérez Sánchez, Lincidio
Resumen

Las limitaciones que presentan los anticuerpos monoclonales de ratón para su uso en la radioinmunoterapia han estimulado la búsqueda de moléculas más pequeñas derivadas de los mismos, que generalmente presentan una mayor permeabilidad a los tejidos, menor tiempo de vida media en sangre y menor inmunogenicidad. Una de las múltiples variantes que se estudian actualmente para lograr este propósito son los fragmentos de anticuerpos en su conformación dimérica, los que por sus características pueden satisfacer las expectativas anteriores, y además mantienen la afinidad funcional del anticuerpo monoclonal original al recrear los dos sitios de unión al antígeno. En el presente trabajo se describe la obtención de un fragmento de anticuerpo dimérico, denominado fragmento anti-CEA M3, con el cual se pretende superar las limitaciones de biodistribución y inmunogenicidad que presenta el anticuerpo monoclonal de ratón CB/iorCEA.1 para su empleo en la radioinmunoterapia del cáncer. El fragmento de este anticuerpo se construyó mediante la unión de las regiones variables de cadena pesada y ligera con un péptido de 5 aminoácidos. El fragmento anti-CEA M3 se expresó de forma activa en el periplasma de E. coli y se purificó mediante cromatografías de afinidad a iones metálicos y de exclusión molecular, lográndose establecer un proceso de producción a escala de 5 Litros de fermentación con un rendimiento final de 3 mg/L de fragmento dimérico. La especificidad de este fragmento por su antígeno se evaluó por ELISA, inmunofluorescencia y itometría de flujo, mientras la afinidad se determinó en un ELISA de competencia y en el BIAcore. El fragmento anti-CEA M3 se logró marcar con alta eficiencia a los isótopos radioactivos 125 I y 131 I a través del método de la cloramina T, alcanzándose elevada estabilidad durante los marcajes. La molécula adiomarcada mantuvo la inmunorreactividad y afinidad por el CEA similar al anticuerpo completo. Experimentos en ratones atímicos xenotransplantados concélulas tumorales humanas LS 174T demostraron una acumulación específica de este fragmento en el tumor y una baja acumulación en el resto de los tejidos. Los primeros resultados obtenidos en el marco de un ensayo clínico fase I con el fragmento anti-CEA radiomarcado con 131 I en pacientes con cáncer colorectal indicaron que el fragmento no produce eventos adversos y no origina inmunogenicidad 1 mes después de la administración. Durante las imágenes gammagráficas se demostró que no se acumula inespecíficamente en los órganos no blancos mientras ocurre una acumulación específica en el tumor. Estos resultados sugieren las posibles ventajas del fragmento sobre el anticuerpo original al usarse en la radioinmunoterapia del cáncer.

Tipo de tesis
Provincia
Año de defensa de la tesis
Número de la resolución 3/2009
Número de páginas 144
Tutor 1 Ayala Avila, Marta
Tutor 2 Pimentel, Gilmara
Institucion donde se realiza Universidad de La Habana. Facultad de Biología
Estado
Tipo de fecha
Materia
Listado Descriptores
Fecha creación 2017-06-09 07:25:20
Fecha de publicación 2017-06-12 09:36:28
Modificado el 2017-08-23 23:37:40
Año resolución
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