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Repositorio de Tesis en Ciencias Biomédicas y de la Salud de Cuba

Implementación de un método de purificación consistente y virológicamente seguro del anticuerpo monoclonal CB.Hep-1 empleado en la purificación el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B

Valdés Véliz, Rodolfo
Resumen

Aborda la implementación de un método eficiente y consistente para la purificación del anticuerpo monoclonal (AcM) CB.Hep-1 empleado en la purificación del antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (AgsVHBr), así como la demostración de su capacidad de eliminación de virus. También se exploró la potencialidad del tratamiento térmico del AgsVHBr en presencia de KSCN para inactivar virus. El empleo de este AcM brinda una alta selectividad y originalidad al método de obtención del AgsVHBr, pero aporta inconvenientes desde el punto de vista regulatorio por el uso de fuentes biológicas que pueden introducir virus patógenos al hombre.El diseño del método de purificación del CB.Hep-1 se basa en la combinación de precipitación salina, cromatografías de afinidad y de exclusión molecular y un paso de ultrafiltración, lo cual permite obtener esta molécula con alta pureza (>95%) y recobrado (>40%). Una vez implementado este método y demostrada su consistencia, se procedió a la caracterización de las fuentes biológicas para la presencia de virus y se validó el desescalado de la cromatografía de afinidad empleada en la purificación del AcM CB.Hep-1. Finalmente, se calculó la capacidad de eliminación de virus mediante el desafío con virus de la cromatografía de afinidad, los procedimientos de higienización y almacenamiento de la matriz de afinidad en etanol, la incubación del AcM en tampón ácido y el tratamiento térmico del AgsVHBr. Los virus modelos empleados en los experimentos de desafío fueron el virus sendai, el virus de la inmunodeficiencia humana, el virus herpes simple humano 1, el poliovirus humano 2 y el parvovirus canino. Los resultados demuestran que este método de purificación del AgsVHBr, no sólo permite su obtención con alta pureza y recobrado sino que también posee una capacidad de eliminación de virus superior a 14 Logs por encima de la contaminación viral de la fuente biológica. Entre los elementos novedosos está en la implementación de un método eficiente y consistente para la purificación del AcM CB.Hep-1, lo cual permite su utilización en la cromatografía de inmunoafinidad para purificar el AgsVHBr. Por otra parte, esta es la única vacuna contra la Hepatitis B obtenida a través de esta metodología que usa un AcM como ligando para purificar el AgsVHBr. Otro aspecto novedoso es que se demuestra la seguridad virológica del método de purificación del AgsVHBr. Esto constituye el primer estudio de validación viral realizado al método de obtención de un antígeno vacunal que emplea en su purificación una proteína proveniente de fuentes biológicas que pueden introducir virus patógenos al hombre. Este trabajo informa además, las bondades del uso de la cromatografía de inmunoafinidad para purificar el AgsVHBr y por primera vez, la alta capacidad de inactivación de virus de la combinación del KSCN con elevadas temperaturas, lo cual justifica su empleo en la obtención de biológicos. Informa también por primera vez el alto grado de inactivación del etanol 70% sobre el parvovirus canino, modelo para el parvovirus de ratón, con elevada resistencia a los agentes físico-químicos y la baja capacidad del etanol al 20% para inactivar virus desnudos. En conclusión, el aporte práctico principal es que la implementación de un método de purificación del AcM CB.Hep-1 y la demostración de su capacidad de eliminación de virus en combinación con el tratamiento térmico del AgsVHBr en presencia de KSCN ha permitido llevar a cabo un extenso programa de vacunación a escala nacional y de exportación de más de 100 millones de dosis de la vacuna cubana contra la Hepatitis B.

Tipo de tesis
Provincia
Año de defensa de la tesis
Número de la resolución 5/2008
Número de páginas 144
Tutor 1 Duarte Cano, Carlos
Institucion donde se realiza Universidad de La Habana. Facultad de Biología
Estado
Tipo de fecha
Departamento Facultad de Biología
Materia
Listado Descriptores
Fecha creación 2017-02-19 14:48:57
Fecha de publicación 2017-05-16 14:26:57
Modificado el 2017-08-22 20:24:59
Año resolución

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