Skip Navigation

Repositorio de Tesis en Ciencias Biom茅dicas y de la Salud de Cuba

Obtenci贸n, caracterizaci贸n y evaluaci贸n de cepas atenuadas de Vibrio cholerae para fines vacunales

Fando Calzada, Rafael
Resumen Ante la inexistencia de una vacuna contra Vibrio cholerae O1 de biotipo El Tor, el agente etiol贸gico m谩s frecuente del c贸lera, se construyen dos plasmidios suicidas: pAJF y pGPH6, destinados a atenuar la virulencia de cepas pat贸genas con fines vacunales. Al construir pAJF se descubre que en el gen ctxA del oper贸n ctxAB del profago CTX桅 se inician transcriptos codificantes de la subunidad CtxB de la toxina col茅rica. Luego, mediante el empleo de pAJF se deleciona el profago CTX桅 de las cepas C6706 (El Tor Inaba) y C7258 (El Tor Ogawa) y se obtienen 413, 417, 81, 82, 84, 87, y 88 y se demuestra que 413 y 81, a diferencia de C7606 y C7258, no producen toxina col茅rica in vitro, ni tienen efecto letal en ratones Balb/c lactantes. Luego, a las cepas 413 y 81 se les reemplaza el gen codificante de la hemaglutinina proteasa por un alelo interrumpido por el gen celA (endoglucanasa A) de Clostridium thermocellum proveniente del plasmidio pGPH6 y se demuestra que las cepas resultantes 638, 631 y 1333 no producen Hap y sintetizan endoglucanasa A activa, lo que permite distinguirlas mediante un ensayo simple. Se demuestra que la expresi贸n de celA y la inactivaci贸n de hap no perjudican la atenuaci贸n ni la colonizaci贸n intestinal de las cepas en ratones Balb/c lactantes y se concluye que celA es un gen marcador apropiado para V. cholerae y hap un locus 煤til donde insertarlo. Se identifica una mutaci贸n colateral en el gen toxR de la cepa 638 que limita la expresi贸n de la fimbria TCP y aten煤a la colonizaci贸n y se encuentra que 638 solo se infecta con el bacteri贸fago CTX桅 tras colonizar el intestino, a diferencia de 81, 631, 413 y 1333 que son susceptibles in vitro. Se demuestra que tras infectarse con CTX桅, las cepas 81,631, 413 y 1333 producen la toxina col茅rica y tienen efecto letal en ratones lactantes, a diferencia de 638 que permanece significativamente atenuada. Se demuestra adem谩s que 638 no se infecta con el fago VGJ桅, un mediador alternativo de la trasmisi贸n de CTX桅 y se concluye que 638 es m谩s segura que las restantes. Se pasa entonces a la prueba de concepto de 638 en voluntarios, donde se obtiene que una dosis oral de 109 UFC induce s铆ntomas ligeros a una frecuencia indistinguible del placebo, despierta una respuesta s茅rica de anticuerpos inhibidores del crecimiento bacteriano y protege a un grupo reducido de voluntarios de contraer el c贸lera al retarlos con la cepa patog茅nica 3008 (El Tor Ogawa). Se concluye que se debe avanzar a la fase de desarrollo tecnol贸gico de 638 y a la evaluaci贸n cl铆nica de lotes producidos cumpliendo las buenas pr谩cticas de manufactura.
PDF
Institución donde se realiza Universidad de Ciencias M茅dicas de La Habana
Tipo de tesis
Provincia
Año de defensa de la tesis
Tutor 1 River贸n, Ana Mar铆a
Versión de tesis
Materia
Lista de descriptores
Número de la resolución 3/2005
Año resolución
Texto Completo
Modificado el 2023-07-16 09:36:10
Fecha creación 2023-07-16 09:36:10
Fecha de publicación 2023-07-16 09:36:10